为什么要鉴定转基因植物(如何鉴定转基因植物)
1,转基因植物中导人的外源基因通常来源于非近缘物种,甚至可以是人工合成的基因。由于受到基因操作的影响可能产生的表型效应和副作用,也不了解它们对人类健康和环境会产生何种影响。
2转基因植物研究的飞速发展,使得大量转基因农作物进入商业生产阶段。转基因植物的大面积释放,就有可能使得原先小范围内不太可能发生的潜在危险得以表现,比如通过基因流破坏生态平衡。
3目前已制定了有关生物安全的管理法规,但还不完善,执行中受到来自企业、科研单位及有关组织等多方面的反弹,因而有必要通过客观的、全面的对转基因植物进行安全评估,为相关法规的制定和执行提供明确的依据。
4由于对生物技术缺乏了解,部分群众对生物技术产品持保留态度,并提出各种各样与安全性有关的疑问。有些国家屡屡出现破坏转基因研究实验的事件。因而有必要通过科学的安全性评估资料,向社会证明转基因植物建立在坚实的科学基础之上、并在严格的管理监督下有序、安全地进行。
转基因的植株要怎样检测?在植物遗传转化中,外源基因导入植物细胞的频率是相当低的。在数量庞大的受体细胞群体中,通常只有为数不多的一小部分细胞获得了外源DNA,而目的整合到基因组并实现表达的转化细胞则更少。
因此,必须采用一定的检测方法,才能筛选和鉴定出含有目的基因的重组体。目前已发展出一系列的转基因植物的筛选和鉴定方法。在这些鉴定和筛选方法,根据检测的基因功能来划分,可分为调控基因(包括启动子终止子等)检测、选择标记基因检测和目的基因直接检测。
根据检测的不同阶段区分,有整合水平检测和表达水平的检测,基因整合检测方法主要有Southern杂交、PCR、PCR-Southern杂交、原位杂交和DNA分子标记技术法,表达水平的检测包括转录水平检测和翻译水平检测,转录水平的检测法有Northern杂交和反转录PCR(reverse:transcribed:PCR,RT-PCR)检测,翻译水平的检测有酶联免疫吸附法(enzyme:linked:immuno:sorbent:assay,ELISA)和Western杂交等,其中最简便和使用广泛的表达水平的检测是报告基因检测法。由于这些方法的具体操作已在其他章节(课程)介绍过,这里只侧重介绍基于选择标记基因和报告基因的筛选和鉴定方法。
如何鉴定转基因植物
这个首先要知道转基因是如何操作的,一般都是通过外源的植物表达载体将外源基因整合到植物基因组中,一般用到的载体上都会带有抗生素标记,比如卡那霉素,潮霉素等等;另外,表达外源基因需要有一段外源加入的启动子序列,一般有35S启动子以及一些组织特异表达启动子比如napin启动子;
根据以上特点,可设计多对针对不同抗生素序列以及启动子序列的引物,提取DNA后进行PCR反应,鉴定即可。
为什么可以利用35S启动子检测转基因植物现在大部分转基因植株都是用抗生素筛选的,一般都是 35s启动子带上一个 抗生素代谢基因,所以我们能通过对35s 的检测来鉴定是否是转基因植株。
在dna水平上分析基因一级结构,拷贝数变化及在染色体上位置可以采用哪些方法基因的一级结构是指脱氧核苷酸的排列测序,解析一级结构最精确的技术就是DNA测序,第一代测序技术为Sanger测序法(双脱氧测序法),第二代测速技术是循环芯片测序技术,第三代测序技术是单分子测序技术;分析某种基因的种类及拷贝数,实质上就是对基因进行定性和定量分析,常用的技术包括DNA印迹技术(Southern印记)和实时定量PCR技术;基因在染色体上位置的检测可以通过荧光分子标记法。
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